... die alten Freunde Doug (Jack Black), Ronald (Paul Rudd) und Kenny (Steve Zahn). Doug sitzt in einer Firma zur Produktion von Hochzeitsvideos fest, während Ronald auch mit Kleinstrollen in Hollywood einfach nur Pech hat. Doch dann kündigt Ronald an, er habe die Recht an ihrem Lieblingsfilm "Anaconda" erwerben können und die drei verhaften ihre Kindheitsfreundin Claire (Thandiwe Newton) als Produzentin und fahren mit ihren Ersparnissen und einem Kleinbudget runter an den Amazonas. Dort lernen sie nicht nur den Schlangentrainer Santiago (Selton Mello) kennen, ihr Boot wird auch noch von der durchsetzungsfähigen Ana Almeida (Daniela Melchior) geführt - sie ahnen jedoch nicht, dass ihre Kapitänin in illegale Goldsucheraktivitäten verwickelt ist und verfolgt wird. Doch das ist noch nichts gegen die monumentale Riesenanaconda, die tatsächlich an ihrem Drehort auf der Lauer liegt...